La ampicilina esta indicada principalmente en el tratamiento de infecciones causadas por cepas susceptibles de los siguientes microorganismos: Shigella, Salmonella (incluyendo Salmonella typhy), Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Proteus mirabilis, Neiseria gonorrhoeae y Enterococcus. También es eficaz en el tratamiento de meningitis causada por Neisseria meningitidis. Como es eficaz contra los patógenos más comunes que causan meningitis, podría ser utilizada por vía intravenosa como tratamiento inicial antes de obtener los resultados de las pruebas de bacteriología. La ampicilina también esta indicada en ciertas infecciones causadas por microorganismos grampositivos susceptibles: estreptococos, estafilococos sensibles a penicilina G y neumococos.

Antes de instituir el tratamiento, se debe hacer cultivos bacteriológicos de los especimenes apropiados para determinar los microorganismos causales y su sensibilidad a la ampicilina. El tratamiento puede instituirse antes de conocer los resultados de los cultivos y pruebas de sensibilidad. Si se utiliza el método de sensibilidad con discos de Kirby-Bauer, debe emplearse un disco de 10 mg de ampicilina para determinar la susceptibilidad relativa in vitro.

Es conveniente reservar la forma parenteral de este fármaco para las infecciones moderadamente graves para los pacientes que no pueden tomar las presentaciones orales (cápsulas o suspensión oral). Tan pronto como sea posible, puede hacerse un cambio a ampicilina oral.

En los pacientes con riesgo particularmente elevado de endocarditis bacteriana (por ejemplo, aquéllos con prótesis valvulares cardiacas), la American Herat Association recomienda el uso de antibióticos profilácticos parenterales antes de los procedimientos odontológicos y cirugía de las vías respiratorias altas y antes de la cirugía e instrumentación del tracto genitourinario o gastrointestinal.